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       Western Blot即免疫印跡法（蛋白質(zhì)印跡法）是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。與Southern Blot、Northern Bolt類似，不同的是，Southern Blot與Northern Blot檢測的物質(zhì)分別為DNA、RNA，Western Blot檢測的是蛋白質(zhì)。

原理

       ●Western Blot：采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物  是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。

      ● 經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。

       ● 免疫印跡法所檢測的蛋白樣品主要來自于人工構(gòu)建的細(xì)胞株系，包括微生物與動植物細(xì)胞，也可從實驗動物體獲得。

       ● 將樣本裂解后，采用有機溶劑或水溶法分離總蛋白后，再進(jìn)行層析或點洗脫制備目的蛋白后，在蛋白中加入等量Loading Buffer煮沸變性就可以進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳的步驟了。

       ● SDS（十二烷基硫酸鈉） 是一種離子性的界面活性劑,它有強離子性的硫酸根離子也帶有疏水性的長碳鏈。當(dāng) SDS 與蛋白質(zhì)混合時，它會以其碳鏈與蛋白質(zhì)之疏水性胺基酸結(jié)合將蛋白質(zhì)包起來，而以硫酸根離子外露與水分子作用。大多數(shù)蛋白質(zhì)和 SDS 的平均結(jié)合量是 1:1.4 (以重量為單位)，而蛋白質(zhì)和SDS結(jié)合后,由于 SDS 帶強負(fù)價，使蛋白質(zhì)原先的帶電價微不足道,且每單位重量的蛋白質(zhì)帶電價一致，所以決定不同蛋白的泳動速率就只剩下分子大小一項因素。